一步步讲新冠病毒的核算检测,怎么做?
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比如我面前有一管疑似病人的血样,除了自己做好防护外,怎么确定这个人有没有感染? 6park.com黄金标准方法是检测核酸。但具体怎么检测呢? 6park.com
6park.com第一步,确定病人的样品合格(质量控制)。 6park.com也不一定要血样,其他可以接受的样品包括:鼻腔,口腔,支气管肺泡灌洗液,等。但标识要清楚明白(不要小看这个,细心,彻底是干这行的重要品质)。就算冰箱保存,也不能超过72小时。如果非要保存更长时间,要冻存于零下70度的冰箱。不合格的样品,一定要打回重新采集,否则检测的结果也不可靠。 6park.com 6park.com第二步,提取样品中的RNA 6park.com 新冠病毒是RNA病毒,高质量的RNA提取是成功的基础。这个需要至少BSL-2的实验室里做。普通实验室是BSL-1,最高是BSL-4。具体的提取方法,有很成熟的试剂盒。但需要训练有素的专业人员,还有一整套的分子生物学工具。比如:离心机,移液枪,手套,试管等等。 6park.com 提取完需要质量控制,不合格的要重来。 6park.com
6park.com 6park.com 6park.com第三步,需要准备好做检测的试剂盒。 6park.com 这里需要的都是消耗品,所以一个合格的检测中心,需要准备充足的量。很多人觉得这个试剂盒是高大上的东西,其实相对来说是最便宜的部分。也根本不需要专利,美国CDC对这个信息是全面披露的。 6park.com 网上看到很多公司的检测试剂盒都是捐赠的,一方面绝对要表扬他们提供的技术,人力和物质贡献,另一方面,其实这些东西真的不贵。比如一个引物(就是表格里的primer,长成 AGC TGC AATT那样的),能测上千个样品,五美金左右,老顾客买多了还有优惠。。。 6park.com
6park.com 6park.com 6park.com第四步,rRT-PCR 6park.com 前面都是准备,这一步才是真正的检测。最关键的是,需要一台能做rRT-PCR的仪器。比如,我自己用的仪器,大概长下面这样。(图来自网络) 6park.com
6park.com 6park.com 6park.com 把第二步得到的RNA,和第三步的检测试剂混在一起。当然具体怎么混是有严格要求的,训练有素的人来做,精确到至少微升级别(10的负6次方)。放进仪器里,反应2-3个小时,就能出结果。 6park.com 具体原理就不详细讲了:1.
RNA合成DNA。 2. 扩增DNA,链式反应,2-4分钟左右一轮,每轮荧光信号增长一倍。3. 每轮拍照,看荧光信号增长了多少。 4. 大概扩增30-45轮。 6park.com 6park.com第五步,分析结果。 6park.com 检测一定要包括,样品本身,阳性对照,阴性对照。 6park.com1.
样品肯定要的,否则检查啥?严格要做三个重复,保证结果可靠。 6park.com2.
阳性对照:这个很重要。因为一个反应都涉及数十种试剂和条件,一个搞错,都可能导致结果错误。阳性对照的意义是保证这些试剂和条件都是对的,否则样品测成什么样都没意义。一般用已知的提纯病毒DNA。 6park.com3.
阴性对照:一般用实验级别的纯净水。这个保证没有污染,免得测什么都是阳性。 6park.com下面的图有点乱,看不懂不是教育系统的错,只是你不是专业人士。总之样品跟阳性对照类似说明携带病毒。跟阴性对照相似,需要再测一遍。两遍都是阴性,说明基本不带病毒,回家隔离,以防万一。 6park.com
6park.com 6park.com 6park.com最后想说: 6park.com 6park.com 6park.com 6park.com 6park.com 6park.com 6park.com 6park.com 6park.com记得笔名美女很早就写文章警告:真正感染的人远大于确诊,因为缺少核酸检测,不能确诊。后来多方消息证明的确有这种情况。
贴主:droobook于2020_02_08 22:38:26编辑评分完成:已经给 droobook 加上 500 银元!
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